瑞氏染色的步骤是什么(瑞氏染色法应注意什么)

标本的采集

1、一般生化检验采集早晨空腹的静脉血，在采血前禁食 8-12 小时；

2、需要不抗凝血的项目，采取规定的血量注入洁净干燥的试管中，室温放置待血液凝固后分离血清；

3、需要抗凝血的项目，一定要看清楚是用哪种抗凝管，需要的血量是多少，注入试管后要充分摇匀，以达到抗凝的目的，特别是专用抗凝管的项目；

4、防污染的项目在采集标本的时候要注意无菌操作，有些项目还要在厌氧的环境下操作；

5、尿液检测需要采集新鲜的中段尿，做生化检测时需加入相应的防腐剂。

采集血标本的注意事项

1、为了减少由于采血时间而造成的检验结果波动，每次采血最好固定在同一时间进行；

2、从卧位到直立位，有些项目所采血液标本的测定值有升高的趋势；

3、止血带压脉时间不能太长，过长易引起多种成分的改变及血管内溶血；

4、红细胞中许多成分的浓度比血清中的高几倍或几十倍，溶血可影响该成分的分析；

5、注射器及针头要洁净干燥无菌，最好选用一次性注射器；

6、抽血时针筒内产生的气泡不要注入试管中，否则易引起溶血；

7、采血后要及时分离血清，分离血清时离心速度不宜过高，离心时间不宜太长；

8、避免在输液、吃药时抽血作为待检标本；

9、血液标本若不能及时送检，应分离血清或血浆放 4℃保存。

抗凝剂的选择

1、肝素：一种较常用的抗凝剂，常用于血气分析和部分生化项目测定 1g/L 的肝素溶液 0.5ml 可使 5ml 血液不会发生凝固；

2、EDTA・Na2 或 EDTA・K2：用于血液细胞分析和血细胞比容测定 1.5-2.2mgEDTA 可阻止 1ml 血液凝固；

3、草酸钾 - 氟化钠：主要用于测定血糖时使用，因氟化钠可抑制红细胞无氧酵解，使血标本中葡萄糖水平在 2-3 天内保持不变；

4、枸橼酸钠：枸橼酸钠溶液常用于凝血因子（PT，APTT）检查，抗凝剂与血液比为 1：9。用于血沉试验为 0.4ml 枸橼酸钠溶液加 1.6ml 血液。

尿标本常用防腐剂

1、浓盐酸用量 0.5-1.0ml/100ml 尿液，适用于尿儿茶酚胺、香草扁桃酸（VMA），17 - 羟和 17 - 酮类固醇等 24 小时尿定量测定；

2、甲苯用量 0.5-1.0ml/100ml 尿液，适用于尿肌肝、尿糖、蛋白质、丙酮等测定；

3、冰醋酸用量 5-10ml/24 小时尿液，适用于 24 小时尿醛固酮测定；

4、甲醛用量 0.2-0.5ml/100ml 尿液，具有防腐和固定尿中有形成分的作用，用于尿液中细胞与管型的保存。常用于 24 小时尿沉渣计数（Addis）测定。

特殊标本的采集要求

1、高血压三项

（1）AⅠ、AⅡ（血管紧张素 AⅠ、AⅡ）共用 5ML。取肘静脉血 5ML，迅速注入放在冷水中冷却的抗凝管内，摇匀。即刻再放回冷水中冷却，等到离心时取出。100 转 / 5 分钟（最好在 4℃离心）分离血浆。此操作应在 15 分钟内完成。而后，血浆放低温冰箱保存（–20℃以下）可用 2 个月；

（2）ALD（醛固醇）3ML 血量，用肝素抗凝，1ML 血浆中加 10uL 肝素注射液（1250 单位）ALD 分离与存放，同血管紧张素同一条件。卧位：晨：6：00-8：00；立位：起床后 3 小时采血；

（3）B - 阻断剂，血管扩张剂，利尿剂及甾体激素，甘草等影响体内肾素水平，一般要停药后两周测定血管紧张素，利血平等代谢的药物应停药后的三周测定。不适停药的病有应改胍乙定等影响血管紧张素较小的降压药；

（4）钠摄入量影响血管紧张素水平，故测定血管紧张素三天前减少食盐摄入量；

（5）放特殊性管颠倒混匀立即放低温送检，注明是否低盐饮食。

2、24 小时尿蛋白定量收集 24h 尿液，用 5-10ml 甲苯防腐，记下总量，混匀取 5ml 送检。

3、糖耐量试验（胰岛素释放试验 C-P 释放试验）

（1）病人准备：试验前 3 日，每日进食碳水化合物不低于 250-300 克，且维持正常活动，影响实验的药物要在 3 日前停用，试验前 10-16 小时患者不能进食；

（2）标本采集：临床上常用的方法是清晨抽空腹血后，口服 100 克葡萄糖后半小时，1、2、3 小时各取血一次（共 5 次）；

（3）标本保存：采血后 1 小时内分离血清并 2-8℃保存送检。

4、尿儿茶酚氨

收集 24h 尿液，用 5-10ml 浓盐酸防腐，记下总量，混匀取 5-10ml 送检。注意留尿前禁用类固醇激素，中药、有色药、激素、降压药、镇静等药物。留尿标本前，停服任何药物后 3 天。

血儿茶酚胺（多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素）：须停用中药、有色素药、香蕉、茶叶及巧克力三天以上（最好是临床症状最明显时如血压最高时抽血），抽血 2ML 用血常规管，抗凝后快速分离血浆送检。（1 小时内分离）。

5、促肾上腺皮激素（ACTH）

血常规管抽血 2ML 颠倒混匀全血，分离血浆保存送检，促肾上腺素要注明采血时间（上午 8 时或下午 4 时）

6、皮质醇用血清做

由于血中皮质醇的浓度在一日内有昼夜节律性变化，参考值也分上午 8：00 和下午 4：00、夜间 10：00，所以一定要在送检中心的申清单上写上抽血时间。

7、24 小时尿游离皮质醇测定

收集 24h 尿液，用 5-10ml 浓盐酸防腐，记下总量，混匀取 5ml 送检。

8、不同性别

男性：取尿道分泌物用细小棉拭子伸入尿道约 2-4 厘米，略捻拭子取出分泌物（应略带黏膜）。将分泌物或棉拭子置 1.5 毫升离心管中加上 1 毫升无菌生理盐水，将拭子在试管中旋转，充分搅拌，处理好后，将盖子压紧，用胶布密封管口，以防标本外泄，并写清楚姓名。（处理标本时要做到无菌操作）；

女性：阴道 ---- 用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物（避免白带），再用无菌棉拭子插入宫颈内，停 5 秒钟后旋动棉拭子采取宫颈分泌物，将棉拭子置入 1.5 毫升离心管中加上 1 毫升无菌生理盐水，将拭子在试管中旋转，充分搅拌，处理好后，将盖子压紧，用胶布密封管口，以防标本外泄，并写清楚姓名。（处理标本时要做到无菌操作）；

尖锐湿疣应采集疣体或组织液于无菌试管内送检。

9、微生物培养标本的采集

基本原则

a、发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查，二、三级医院微生物标本送检率不应低于 70%；

b、尽量在抗菌药物使用前采集标本；

c、标本采集时应严格执行无菌操作，减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染；

d、标本采集后应立即送至实验室，床边接种可提高病原菌检出率；

e、以棉拭子采集的标本如咽拭、肛拭或伤口拭子，宜采用插入运送培养基送检；

f、混有正常菌群的标本如咳痰、尿液、伤口拭子，不可置肉汤培养基内送检；

g、盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂；h、送检标本应注明来源和检验目的，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。

注意：细菌培养的标本收集时应注意无菌操作，所用的培养杯、试管必须是无菌的。

a、下呼吸道分泌物（痰液）：

嘱患者清晨起床后用于清水漱口，不要刷牙，立即从下呼吸道咳出第一口痰，吐在专用的无菌杯内，常温保存送检。对于不能及时送检者，可暂存 4℃冰箱。

b、粪便：

取有黏液、浓血部分的粪便约 2-3 克（如稀水便则取絮化物），盛于灭菌广口瓶或无菌容器中。用棉拭挑取粪便插入运送培养基或 PH7.0 的磷酸盐甘油中送检，可提高病原菌检出率。

c、血液、脑脊液、胆汁、穿刺液、胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液：无菌抽取 5ml 注入专用培养瓶（增菌液）中，轻轻混匀，常温保存送检。

d、尿液培养：

取中段尿 5-10ml 于无菌试管中送检。

e、生殖器官标本：

阴道、子宫、颈及前列腺等分泌物应由医生采集，收集于无菌试管内送检。尖锐湿疣应采集疣体或组织液于无菌试管内送检。

f、烧伤标本：

以专用无菌棉拭子直接采取多个部位创面的浓液分泌物放入于无菌试管内送检。

10、结核杆菌 DNA 定量检测

血清、母乳、脐血、眼部分泌物、阴道分泌物、精液、尿道分泌物等体液标本及各种组织标本。

11、疟原虫

发热后 10 小时内抽末稍血瑞氏染色镜检。

12、液基薄层细胞学采集

将专用刷子平行插入子宫颈内，直到刷子最下面的刷毛暴露在子宫外为止。用力轻轻固定、避免刷子滑出；然后将宫颈刷向同一方向转 3-5 圈，不要太用力或转得过多以免出血冲淡细胞，要使用恰当的力度保证取到更多的细胞。

注意：

a、经期不能取材；

b、分泌物太多时要用干棉签擦干净后再取；

c、宫颈糜烂严重的旋转不要超过 3 圈，以免出血；

d、旋转时向同一方向，勿来回转动以免加大创伤引起出血。

影响结果的生物学因素

1、年龄

从胎儿出生到儿童、成年和老年的各个时期检查的正常参考值都不完全相同，不能用同一标准来衡量。新生儿出生的头几天红细胞计数和血红蛋白含量比成人高，儿童血液中碱性磷酸酶含量较成人高，老年人胆固醇含量较高所以易患动脉粥样硬化症。

2、性别

男性肌肉比较发达，所以血液中肌肝、肌酸激酶含量较女性高。其他男性较女性高的指标有甘油三脂，r - 谷胺酰转移酶，胆红素，转氨酶，尿素，红细胞，血红蛋白等。女性比男性高的指标有高密度脂蛋白胆固醇，载脂蛋白 AⅠ，女性激素和网织红细胞等。

3、妊娠

随着孕期的延长，孕妇各系统将发生一系列的生理性变化，如甲状腺素分泌增加，总蛋白，白蛋白含量减少，肾小球滤过率增加，尿量增多，红细胞沉降率加快，凝血因子活性增强，纤维蛋白原增多，甲胎蛋白升高等。

4、饮食

饮食对血液生化检验指标的影响取决于饮食的成分和进食时间；

餐后抽血检查对血脂、血糖、转氨酶、胆红素、无机磷、尿酸、尿素、总蛋白、钾、钠、钙等都有较大的影响，因此在测定这些指标时应禁食 12 小时。饮酒可使糖异生受抑制，从而导致血糖降低，血乳酸、尿酸升高。长期酗酒可引起肝脏损害，r - 谷氨酰转移酶升高。

5、运动

由于呼吸加快，出汗较多，体液分布发生改变导致血液生化指标的明显变化。如马拉松运动员跑完全程后 45 分钟抽血检查与赛前相比，钾、钠、钙、碱性磷酸酶、白蛋白、血糖、无机磷、转氨酶、尿素、尿酸、胆红素等将升高 1 倍以上。因此采集标本前应注意休息，避免剧烈运动。

6、药物和毒品

药物和毒品对生化检验可带来复杂的影响，它们不仅可改变某些物质在体内的代谢过程，同时也可干扰实验过程中的化学反应，如维生素 C，它是一种还原剂，可干扰葡萄糖氧化酶法测定血糖，使之降低而误认为低血糖。长期口服避孕药和雌激素类药物可使转铁蛋白、甘油三脂升高，因此在采血前应停用这药物。吗啡可使血淀粉酶、脂肪酶、转氨酶、肝、尿酸、血糖降低。

一份标本是否合格直接决定着检验质量，更关乎着病人的生命和健康，采集合格标本，认真的去分析标本的影响因素，从而为病人的健康保驾护航，真正的做到检以求真，验以求实，是我们每个检验人义不容辞的责任！